隨著化妝品使用越來越廣泛。已成為人們?nèi)粘Ｉ钪械谋匦杵贰ｉ_展化妝品衛(wèi)生質(zhì)量監(jiān)測。是保障人民健康維護(hù)消費(fèi)者的利益，如使用了細(xì)菌總數(shù)超標(biāo)的化妝品。會導(dǎo)致皮膚感染 。因此，化妝品細(xì)菌總數(shù)測定是便于判明樣品被污染的程度。是對樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評價的重要依據(jù) 。
一、實(shí)驗(yàn)原理
菌落總數(shù)是指化妝品檢樣經(jīng)過處理，并在一定條件下培養(yǎng)后，得到的1g或1ml檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。
菌落總數(shù)的測定（平板活菌計數(shù)法）是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的菌落（即由一個單細(xì)胞繁殖而成，且肉眼可見的子細(xì)胞群體）的生理及培養(yǎng)特征進(jìn)行的。也就是說，一個菌落即代表一個單細(xì)胞。
測定時，首先將待測樣品制成均勻的、一系列不同稀釋度的稀釋液，并盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散，使之成為單個細(xì)胞狀態(tài)存在（否則1個菌落就不能代表1個菌）；再取一定稀釋倍數(shù)的一定量稀釋液接種到培養(yǎng)基上，使其均勻分布。菌落由單個細(xì)胞生長繁殖而成，因此通過統(tǒng)計菌落的數(shù)目，可計算樣品中的含菌數(shù)。
由于所計算出的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故不包括死菌，因此菌落總數(shù)的測定又稱為活菌計數(shù)。
菌落總數(shù)可作為判定食品被污染程度的標(biāo)志，也可用于觀察細(xì)菌在食品中繁殖的動態(tài)，以便在對被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評價時提供依據(jù)。
前邊所述的細(xì)菌菌落總數(shù)實(shí)際上僅為樣品中總細(xì)菌數(shù)的一部分，其余細(xì)菌皆因種種原因未能長出。每種細(xì)菌都有其一定的生理特性，欲將各種細(xì)菌都有培養(yǎng)出來，就必須創(chuàng)造各種不同的培養(yǎng)條件，包括營養(yǎng)、溫度、pH、需氧性等，去滿足各種細(xì)菌的要求。在實(shí)際工作中，不可能也不必要培養(yǎng)出所有的細(xì)菌，所得結(jié)果只是能在肉汁營養(yǎng)瓊脂上生長的嗜中溫需氧性的菌落總數(shù)。
二、儀器設(shè)備
?。?）培養(yǎng)箱：（36±1）℃。
?。?）恒溫水浴鍋：（46±1）℃。
?。?）天平。
?。?）滅菌廣口瓶或三角瓶：500ml。
（5）滅菌培養(yǎng)皿：皿底直徑9.0㎝。
?。?）滅菌吸管：1.0㎝、10.1㎝。
（7）滅菌小試管。
（8）玻璃珠：直徑5㎜。
（9）均質(zhì)機(jī)。
?。?0）滅菌刀、剪刀、鑷子。
?。?1）酒精燈。
三、培養(yǎng)基和試劑
營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
成分：
蛋白胨 10g 瓊脂 15～
牛肉膏 3g 蒸餾水
氯化鈉 5g pH 7.2～
制法：將除瓊脂以外的各成分溶于蒸餾水中，用15%的NaOHt調(diào)節(jié)pH使之在7.2～7.4。加入瓊脂，于121℃下高壓滅菌
生理鹽水
成分：
蒸餾水
制法：一般每種檢樣配制250ml無菌生理鹽水。稱取2.2gNaCl,加入250ml蒸餾水溶解；分裝于2支大試管中，每支9ml;再量取225ml裝于500ml廣口瓶或三角瓶中，并加入適量的玻璃珠；剩余的裝入另1支試管中，包扎后于121℃下高壓滅菌15min。
﹪的酒精棉球。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序
檢樣
↓
制成幾個適當(dāng)倍數(shù)的稀釋度
↓
選擇2～3個適宜的稀釋度，個取1ml加入滅菌培養(yǎng)皿
↓
每皿內(nèi)各加入適量的營養(yǎng)瓊脂
±1)℃↓
菌落計數(shù)
↓
報告
菌落總數(shù)的檢驗(yàn)程序
在無菌條件下，將25ml(或25g)檢樣剪碎，放入裝有225ml無菌生理鹽水和適量玻璃珠的500ml廣口瓶或三角瓶內(nèi)，經(jīng)充分振搖，形成10-1均勻稀釋液。
用1ml的無菌吸管吸取10-1稀釋液1ml，注入裝有9ml無菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖混合均勻，即為10-2稀釋液。再用此吸管吸取10-1稀釋液各1ml于2個培養(yǎng)皿內(nèi)。
另取1ml的無菌吸管吸取10-2稀釋液1ml，注入裝有 9ml無菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖混合均勻，即為10-3稀釋液。再用此吸管吸取10-2稀釋液各1ml于2個培養(yǎng)皿內(nèi)。
采用相同的方法吸取10-3稀釋液各1ml于2個培養(yǎng)皿內(nèi)。
檢樣在36±1℃下48h后營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中細(xì)菌的菌落數(shù)。
